荧光原位杂交(Fluorescenceinsituhybridization，FISH)技术是在已有的性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非性DNA分子原位杂交技术。它利用荧光标记的核酸片段为探针，与染色体上或DNA显微切片上的特异fl-N：~行杂交，通过荧光检测系统(荧光显微镜)检测信号DNA序列在染色体或DNA显微切片上的目的DNA序列，动物组织原位杂交，进而确定其杂交位点。FISH技术检测时间短，检测灵敏度高，无污染，已广泛应用于染色体的鉴定、基因定位和异常染色体检测等领域。原位杂交第三天1）用1ml含10％热灭清的MABT溶液置换溶液，放置摇床上25分钟，然后用1mlMABT置换，25分钟，再用1mlMABT溶液置换，一小时以上，后用1mlMABT溶液置换，25分钟。2）用1ml1mM左旋米睉的Stainingbuffer洗三次，每次放置五分钟。3）将胚胎转入十六孔板中，吸去stainingbuffer，加上300ulBMPurpleAPSubstrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上锡箔纸以避光，避免摇动，室温下显色。4）每隔一小时观察胚胎是否开始显色5）将显色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗两三次后加上4％多聚甲醛固定，拍照。6）4C冰箱保存。菌落的裂解及DNA结合于纤维素滤膜（1）在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/LNaOH的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，将滤膜放到小洼上，展平保鲜膜，使滤膜均匀湿润，让滤膜留于原处2-3分钟。（2）用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜，用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/LNaOH重复步骤（1）。（3）吸干滤膜，将滤膜转移到新的带有1mol/LTris·Cl(pH7.4）的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜，再重复一次该步骤。（4）吸干滤膜，把它转移到有1.5mol/LNaCl、0.5mol/LTris·Cl(pH7.4）的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜，转移到一张干的滤纸上，置于室温20-30分钟，使滤膜干燥。（5）将滤膜夹在两张干的滤纸之间，在真空烤箱中于80℃干烤2小时，固定DNA。（6）将固定在膜上的DNA与32P标记的RNA进行杂交。武汉贝科新肽-动物组织原位杂交由武汉贝科新肽科技有限公司提供。行路致远，砥砺前行。武汉贝科新肽科技有限公司致力成为与您共赢、共生、共同前行的战略伙伴，更矢志成为化学试剂具有竞争力的企业，与您一起飞跃，共同成功!)