探针杂交将标记的探针溶液滴加于样本，在适宜温度（如37-65℃）下孵育数小时至过夜，使探针与目标RNA特异性结合。洗涤用不同浓度的盐溶液洗涤样本，去除未结合的游离探针，降低背景信号。信号检测若为荧光探针：直接用荧光显微镜观察荧光信号；若为生物素/探针：通过亲和素-生物素复合物或结合标记物，再用酶（如辣根过氧化物酶）催化显色剂（如DAB）产生可见信号。结果分析观察信号的位置（如细胞内、组织区域）、强度和分布，结合形态学特征解读结果。实验步骤（以石蜡组织切片RNA原位杂交为例）样本制备组织固定：用甲醛等固定剂保存组织形态和核酸（避免RNA降解）；包埋与切片：将固定组织石蜡包埋，切成5-10μm薄片并贴附于载玻片。预处理脱蜡：用、乙醇去除石蜡，暴露组织；通透处理：用蛋白酶K等消化组织蛋白，动物组织原位杂交，增加探针对细胞的穿透性；变性（仅DNA原位杂交）：高温使DNA双链解旋为单链（RNA原位杂交无需此步骤，因RNA为单链）。原位杂交技术原位杂交技术（InSituHybridization，ISH）是一种在生物样本（如组织切片、细胞涂片等）的原始位置上，通过核酸分子间的碱基互补配对原理，检测特定DNA或RNA序列的分子生物学技术。它能保留目标核酸在样本中的空间分布信息，是研究基因表达定位、染色体结构及病原体等的重要工具。一、技术原理原位杂交的原理是核酸分子的碱基互补配对：探针设计：人工合成与目标核酸（DNA或RNA）序列互补的单链核酸片段（称为“探针”），并对探针进行标记（如荧光、生物素等）。杂交反应：将标记的探针与经过处理的样本（含待检测核酸）孵育，探针通过碱基互补配对（A-T/U、G-C）与目标核酸特异性结合，形成杂交复合物。信号检测：通过检测探针上的标记物（如荧光信号、显色信号），定位目标核酸在样本中的位置和表达强度。动物组织原位杂交-武汉贝科新肽公司由武汉贝科新肽科技有限公司提供。武汉贝科新肽科技有限公司是从事“原位杂交,亚细胞定位,蛋白互作,启动子筛选”的企业，公司秉承“诚信经营，用心服务”的理念，为您提供更好的产品和服务。欢迎来电咨询！联系人：夏先生。)