基因法转化洋葱表皮细胞：分别用70%乙醇和灭菌蒸馏水清洗金粉（直径为1μm），加入灭菌蒸馏水制成金粉悬浮液，蛋白免疫定位，取100μL放在含有1.0cm2洋葱表皮的玻璃皿中，边振荡边加入10μLpCambia2301-GaMYB2-GFP质粒，逐步加入40μL0.1mol·L-1亚精胺和100μL2.5mol·L-1CaCl2，振荡混匀。基因GDS-80轰击时氦气罐的气压为1300psi，取10μLDNA包裹好的微粒悬浮液加到基因中央，进行轰击，之后放置25℃避光过夜培养，使用ConfocalLaser激光共聚焦显微镜观察。为什么不先对一个基因做预测，在预测的结果上直接做共定位？不同的预测网站有不同的计算方法，同一个基因在不同的预测网站也可能得出不同的定位结果。另外所有的结果都应是基于实验得到的，对于不清楚可能定位在哪里的基因，一般推荐先做普通定位，根据普通定位的结果再决定做哪种细胞器的共定位。为什么有的基因做原生质体转化时荧光蛋白不亮？不同物种的细胞可能对基因表达有影响，当在一种材料的原生质体中观察不到荧光时，可以考虑换一种受体材料。另外，如果是分泌蛋白，在原生质体中无法观察到荧光，此时可以考虑注射叶片来观察荧光。拍摄时为什么有明场通道？（1）显示细胞状态，有活力的原生质体细胞应该是饱满圆润的，变形或破碎的细胞说明此时细胞不是适状态或细胞已。（2）显示荧光确实是细胞内蛋白表达的，而不是细胞碎片及杂质产生的杂光。为什么有的共定位图片中叶绿体通道是玫红色？在拟南芥、、玉米、大麦、小麦等材料中，种植培养苗子时是正常接受光照的，叶片中含有大量叶绿体，而叶绿素在640nm左右的激发光下可产生红色的自发荧光。当在这些含叶绿体较多的受体材料中做共定位实验时，共定位marker一般为红色荧光（在560nm左右的激发光下），实验及共聚焦拍摄时两个波长通道的荧光互不影响，但视野下看着比较混淆，尤其叠加后二者不易分清，因此只是在颜色显示上将叶绿体自发荧光设置为玫红色，以显示和共定位marker的区别。蛋白免疫定位-贝科新肽(推荐商家)由武汉贝科新肽科技有限公司提供。蛋白免疫定位-贝科新肽(推荐商家)是武汉贝科新肽科技有限公司今年新升级推出的，以上图片仅供参考，请您拨打本页面或图片上的联系电话，索取联系人：夏先生。)